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One-step fluorescent quantitative PCR kit: quantitative rapid lane, precise fluorescent navigation!
Published Time:
2024-12-06
Quantitative Real-time PCR (qPCR) is a method that measures the total amount of product after each polymerase chain reaction (PCR) cycle during DNA amplification using fluorescent chemicals. It is a method for quantitatively analyzing specific DNA sequences in a sample using an internal or external reference. Real-time PCR detects the PCR process in real time through fluorescence signals during PCR amplification. Because there is a linear relationship between the Ct value of the template and the initial copy number of the template during the exponential phase of PCR amplification, it becomes the basis for quantification.
实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR） 是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。
定量逆转录PCR（quantitative reverse transcription PCR, RT-qPCR） 是应用于以RNA作为起始材料的PCR实验中的一种实验方法。在该方法中，总RNA或信使RNA（mRNA）首先通过 逆转录酶 转录成 互补DNA（cDNA） 。随后， 以cDNA为模板进行qPCR反应 。RT-qPCR已被用于多种分子生物学的应用中，其中包括基因表达分析、RNA干扰验证、微阵列验证、病原体检测、基因测试和疾病研究。
RT-qPCR可通过一步法或两步法来完成。一步法RT-qPCR把逆转录与PCR扩增结合在一起，使逆转录酶与DNA聚合酶在同一管内同样缓冲液条件下完成反应。一步法RT-qPCR只需要利用序列特异性引物。在两步法RT-qPCR中，逆转录和PCR扩增过程是在两个管中完成，使用不同的优化的缓冲液、反应条件、以及引物设计策略。
| 优点 | 缺点 | |
| 一步法 |
1、由于两步反应都在一个管中完成，因此该方法具有更 少的实验误差 2、更少的移液步骤能够减少污染的风险 3、适用于高通量扩增/筛选，快速且可重现性高 |
1、无法分别对两步反应进行优化 2. 由于反应条件是结合两步反应折衷得到的，因此 灵敏性不如两步法 3、单一样品检测的靶点数较少 |
| 两步法 |
1、能够建立可以长期保存，并用于多次反应的稳定的CDNA 库 2、 靶基因和内参基因能够从同一个cDNA库进行扩增 而不需要多重cDNA库 3、能够优化单一反应过程的反应缓冲液和反应条件 4、灵活的引发条件选择 |
1、使用多个试管，以及更多的移液步骤会增加DNA污染的风险,并且耗时。 2、相较于一步法，需要进行更多的优化 |
简石生物一步荧光定量PCR试剂盒·产品特点
高检测灵敏度： 可检测到个位数拷贝的模板或 0.1pg 的总 RNA。
多重检测： 支持多重探针检测。
抗污染体系： 使用的是 dUTP/UNG 防污染体系，不含 dTTP，能有效消除扩增产物的污染。
本产品适用于人源、病毒、细菌 RNA 或者体外转录 RNA 等的定量或定性检测。
使用简石生物一步法RT-qPCR试剂与厂家A及厂家B的RT-qPCR试剂进行对比：底物模板分别为RNA及cDNA，相同底物模板情况下，简石试剂Cq值最小，且误差值最低，证明简石RT-qPCR试剂性能最优，且稳定性最好可重复最高！
针
使用简石一步法RT-qPCR试剂对不同浓度RNA底物模板进行检测，结果表明：简石试剂可对低至0.01ng/μl的RNA模板进行检出，具有及高的检测灵敏度，可适用于各种低载量RNA病毒的检测，更符合目前的病毒检测试剂盒要求。
【预期用途】
用于 唾液、口腔、鼻腔 不集后的样本的预处理，使样本中的核酸(DNA 和RNA)释放出来。以便于使用体外诊断试剂或仪器对待测物进行检测。
【检测原理】
Nucleic acid release agents can rapidly disrupt protein structures and remove nucleases from samples, ensuring effective nucleic acid release.
No extraction needed, direct detection is possible!
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